第1部:知っておきたいHPLCの基礎知識
《主旨》HPLCを理解する上で必要な基礎知識として、基本原理、各種用語、基本パラメーター、装置各部について解説します。
1.HPLCの原理と各種パラメーター
・クロマトグラフィーとは、分離の仕組み
・クロマトグラムの読み方、基本パラメーターの定義と意味
2.HPLCにおける分離モード
・極性の基本的な考え方
・移動相の溶出力と溶媒強度
・吸着、分配(順相・逆相)、イオン交換、サイズ排除の原理
3.HPLC装置の基礎
・送液部(送液ポンプ、グラジエント溶離、脱気装置)
・試料導入部(オートサンプラー、マニュアルインジェクター)
・分離部(カラム、充塡剤、カラムオーブン)
・検出部(吸光光度検出器、蛍光検出器、示差屈折率検出器など)
第2部:現場で必要な実践ノウハウ
《主旨》HPLCを実際に分析の現場で使う際、知っておくべきノウハウについて、分析の手順に沿って解説します。
1.移動相に関するノウハウ
・水、有機溶媒、緩衝液の選び方と留意点
・移動相の調製方法と脱気
2.試料調製と注入に関するノウハウ
・試料溶媒の選び方と留意点
・試料前処理の基本
3.分離に関するノウハウ
・逆相における分離の最適化(カラム、移動相、温度)
・グラジエント溶離の留意点
4.検出に関するノウハウ
・検出器の選び方と留意点
・誘導体化検出法
第3部:よくあるトラブルとその対処法
《主旨》日常的にHPLC分析を行っているとしばしば遭遇するトラブルについて、症状別に考えられる原因とその対処法を解説します。
1.負荷圧の上昇
2.ノイズの増大とドリフト
3.保持時間の変動
4.ピーク面積の変動
5.不明ピークの出現
6.ピーク形状の異常